dam-/dcm-感受态细胞

储存条件：-70℃保存，避免反复冻融。不适合在液氮中保存。

产品介绍：

本公司生产的dam-/dcm-感受态细胞是采用大肠杆菌dam-/dcm-菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞。dam-/dcm-菌株来源于大肠杆菌K12菌株，该菌株为dam和dcm甲基化酶失活突变型菌株，常用于质粒DNA的去dam和dcm甲基化处理，消除dam和dcm甲基化对酶切的影响。核酸内切酶 (endA1)基因的缺失有利于提高质粒DNA的产量和质量。甲基化酶的失活突变可能会导致质粒DNA在该菌株中会出现突变，不建议连接产物的转化实验，仅用于质粒转化。菌株还具有抗T1噬菌体感染的特点。pUC19质粒检测转化效率>×106cfu/μg DNA。

基因型：ara-14 leuB6 fhuA31 lacY1 tsx78 glnV44 galK2 galT22mcrA dcm-6 hisG4 rfbD1 R(zgb210::Tn10) TetSendA1 rspL136 (StrR)dam13::Tn9 (CamR) xylA-5 mtl-1 thi-1 mcrB1 hsdR2

菌株抗性：对氯霉素、链霉素有抗性；对氨苄青霉素、卡那霉素、壮观霉素和四环素敏感。

质粒转化步骤：

1.将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后，加入1-5μl含有1-100ng的质粒DNA到细胞中，用手指拨打管底，轻轻混匀。

2.冰水浴中放置30分钟，不要晃动。

3.42℃热击60秒钟，不要晃动。

4.冰水浴中放置2分钟，不要晃动。

5.加入500μl的室温SOC或LB培养基。

6.置于37℃摇床中，150-200rpm震荡复苏培养60分钟。

7.取50-100μl菌液涂布在含有抗性的LB平板上。待液体吸干后，倒置平板，37℃培养12-18小时。

（平板划线分离法：复苏培养结束后，12000rpm离心30秒钟，弃掉上清，留100μl左右的液体，用200μl吸头轻轻吹打散菌块，取10μl重悬的菌液分多点滴在平板上，倾斜吸头，用吸头头部的侧面将滴在平板上的液体来回划线。这个方法可以获得更大的单克隆菌落。此方法主要适用于质粒转化，连接产物转化最好用涂布法。）

（质粒快速转化步骤：将步骤2的时间缩短到5分钟，对于氨苄青霉素抗性的质粒，步骤4完成后，可直接涂布或划线于含氨苄青霉素抗性的LB平板上。其它抗性的质粒仍需60分钟的复苏培养。）

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