Tuner(DE3)感受态细胞

储存条件：-70℃保存，避免反复冻融。不适合在液氮中保存。

产品介绍：

Tuner(DE3)为LacYZ突变型BL21(DE3)菌株。Tuner(DE3)菌株可利用IPTG的加入量来精准地控制重组蛋白的表达量，与pET系列载体联合使用，可以使得蛋白表达从低表达水平到高表达水平进行有效调控（使用低浓度的IPTG诱导重组蛋白低水平表达时，目的蛋白可能会具有更好的可溶性和生物活性）。该菌株含有λ噬菌体DE3区，可以表达T7 RNA聚合酶。Tuner(DE3)菌株属于B菌株，lon和ompT蛋白酶缺陷型。Tuner(DE3)感受态细胞由特殊工艺制成，pUC19质粒检测转化效率达107cfu/μg DNA。

基因型：F-ompT hsdSB (rB-mB-) gal dcmlacY1(DE3)

菌株抗性：对氨苄青霉素，卡那霉素，氯霉素和四环素敏感。

质粒转化步骤：（以氨苄青霉素抗性的pET质粒为例）

1.将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后，加入1-5μl含有1-100ng的质粒DNA到细胞中，用手指拨打管底，轻轻混匀。

2.冰水浴中放置30分钟，不要晃动。

3.42℃热击60秒钟，不要晃动。

4.冰水浴中放置2分钟，不要晃动。

5.加入500μl的室温的SOC或LB培养基。

6.置于37℃摇床中，150-200rpm，复苏培养60分钟。

7.取50-100μl菌液涂布在含有氨苄青霉素抗性的LB平板上。待液体吸干后，倒置平板37℃培养12-24小时。

（平板划线分离法：复苏培养结束后，12000rpm离心30秒钟，弃掉上清，留100μl左右的液体，用200μl吸头轻轻吹打散菌块，取10μl重悬的菌液分多点滴在平板上，倾斜吸头，用吸头头部的侧面将滴在平板上的液体来回划线。这个方法可以获得更大的单克隆菌落）。

（详情见说明书）