pcDNA3.1(+) Seamless Cloning Kit

产品介绍：

pcDNA3.1(+)载体为哺乳动物细胞表达载体，具有人巨细胞病毒(CMV)启动子，在哺乳动物细胞中高水平表达；新霉素抗性基因，用于选择稳定细胞系。本产品提供pcDNA3.1(+)经EcoRⅠ酶切后的线性化载体，可用无缝克隆技术将单个或多个DNA片段组装到载体上。

无缝克隆技术可在重组酶的作用下，只需一步反应，便可将片段克隆到任何载体中的任意位置，得到重组质粒。无缝克隆技术作为一种非常强大的克隆技术，具有快速、简便、高效、多片段组装和定向克隆等特点，用于单个 DNA 片段的克隆，多个 DNA 片段组装克隆以及多位点突变构建等实验目的。

产品特点：

1.pcDNA3.1(+)具有人巨细胞病毒(CMV)启动子，在哺乳动物细胞中高水平表达。

2.pcDNA3.1(+)具有新霉素抗性基因，用于选择稳定细胞系。

3.pcDNA3.1(+)经EcoRⅠ酶切后的线性化载体，省时省力。

4.无缝克隆技术只需要简单的 PCR 扩增就可以制备片段DNA。

5.可以克隆长片段和多片段DNA。

操作步骤：

1.pcDNA3.1(+)线性化载体使用方法：

(1)pcDNA3.1(+)线性化载体当做克隆载体使用，可以在扩增PCR产物的

上游引物 5’端添加序列：TAGGGAGACCCAAGCTGGCTAGCgccacc（gccacc为Kozak序列）

下游引物 5’端添加序列：CACTGTGCTGGATATCTGCAGAATTC

通过无缝克隆连接到pcDNA3.1(+)中。

(2)测序引物

pcDNA3.1-R(BGH-R):TAGAAGGCACAGTCGAGG

(3) pcDNA3.1(+)线性化载体为 EcoRⅠ酶切后的线性化载体，图谱及多克隆位点见下图。

详情见说明书

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