pET-32a(+) Seamless Cloning Kit

产品介绍：

pET-32a(+)载体为高水平的原核表达载体，在N端含有TrxA(Trx-tag，硫氧还蛋白标签)有利于蛋白的可溶性表达。pET-32a(+)在N端还含有His-Tag, Thrombin（凝血酶）酶切位点，S-Tag，Enterokinase(肠激酶)酶切位点，在C端具有His-Tag。本产品提供pET-32a(+)经EcoRⅠ酶切后的线性化载体，可用无缝克隆技术将单个或多个DNA片段组装到载体上。

无缝克隆技术可在重组酶的作用下，只需一步反应，便可将片段克隆到任何载体中的任意位置，得到重组质粒。无缝克隆技术作为一种非常强大的克隆技术，具有快速、简便、高效、多片段组装和定向克隆等特点，用于单个DNA片段的克隆，多个DNA片段组装克隆以及多位点突变构建等实验目的。

产品特点：

1.pET-32a(+)载体为原核表达载体，具有N-TrxA, N-His，N-Thrombin, N-S，N-Enterokinase和C-His。

2.pET-32a(+)经EcoRⅠ酶切后的线性化载体，省时省力。

3.无缝克隆技术只需要简单的PCR扩增就可以制备片段DNA。

4.可以克隆长片段和多片段DNA。

5.简单、快速、精确、定向克隆。

操作步骤：

1.pET-32a(+)线性化载体使用方法：

(1)pET-32a(+)线性化载体当做克隆载体使用，可以在扩增PCR产物的

上游引物5’端添加序列：GTACCGACGACGACGACAAGGCCATG

下游引物5’端添加序列：CTCAGTGGTGGTGGTGGTGGTGCTCGAG

通过无缝克隆连接到pET-32a(+)中。

(2)测序引物

PET-32A-SEQR: 5'-CTGGTTCTGGCCATATGCAC-3'

T7t: 5'-GCTAGTTATTGCTCAGCGG-3'

(3)pET-32a(+)线性化载体为EcoRⅠ酶切后的线性化载体，图谱及多克隆位点见下图。

详情见说明书

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