【新品】LBA4404(pSoup)农杆菌感受态细胞

储存条件：-70℃保存，避免反复冻融。不适合在液氮中保存。

基因型：Ach5 (rif R) Ti pAL4404 (strepR) Octopine pSoup(tetR)

产品介绍：

农杆菌LBA4404菌株为Ach5型背景，核基因中含有利福平抗性筛选基因rif。为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的章鱼碱型Ti质粒pAL4404，此质粒含有vir基因（vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件，pAL4404质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA 顺利转移）。pAL4404型Ti质粒含有筛选标签基因strep，赋予LBA4404菌株链霉素抗性。一些缺失农杆菌复制相关元件（如pVS1的复制起点REP区或pVS1质粒的STA区）的表达质粒如pGreen、pGreenII-62SK和pGs2等不能在LBA4404菌株中繁殖。辅助质粒pSoup可以帮助这些不完整双元表达质粒在农杆菌中的复制并使LBA4404(pSoup)菌株具有四环素（Tet）抗性。适用于菸草、番茄和烟草等植物的转基因操作。LBA4404 (pSoup)农杆菌感受态细胞经特殊工艺制备，经pGs2质粒检测，转化效率可达103cfu/μg，-70℃保存12个月转化效率不发生改变。

转化方法:（采用冻融方法）

1. 取-70℃保存的LBA4404 (pSoup)农杆菌感受态细胞于冰水浴中融化；

2. 无菌条件下，向感受态细胞中加入100ng-1μg质粒DNA（第一次使用，最好做一下预实验，确定所加质粒的最佳量），轻轻混匀，冰水浴中静置5 分钟；

3. 将离心管置于液氮中速冻5分钟；（注：可用干冰和无水乙醇混合物代替液氮）

4. 然后快速将离心管置于37℃水浴中保持5分钟，不要晃动水面；

5. 将离心管放回冰水浴中，冰浴5分钟；

6. 无菌条件下加入800μl无抗生素的2xYT、SOB、SOC或LB液体培养基，于28℃振荡培养2-3小时，菌体复苏；

7. 6000rpm离心1分钟收菌，留100μl左右上清，轻轻吹打重悬菌体，取适量菌液，涂布于相应抗生素的LB平板上，于28℃培养箱中倒置培养48-72小时。（实验表明当平板只含有50μg/ml的Kan时，28℃培养48 h即可看到菌落；平板中含有50 μg/ml Kan和20 μg/ml Rif 时，需28℃培养60 h可看到菌落； 如果平板中含有50 μg/ml Kan和50 μg/ml Rif时则需要28℃培养72-90 h可看到菌落）。

（详情见说明书）

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