GV3101 农杆菌感受态细胞

产品介绍：

GV3101菌株为C58型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因Rif，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型Ti质粒pMP90 (pTiC58DT-DNA)，此质粒含有vir基因（vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件，pMP90 (pTiC58DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移）。

pMP90 (pTiC58DT-DNA)型Ti质粒含有筛选标签：Strep和Gent，赋予GV3101菌株链霉素和庆大霉素抗性，适用于拟南芥、烟草、玉米、土豆等植物的转基因操作，经植物双元pCAMBIA2301质粒检测，转化效率可达103cfu/μg，-70℃保存12个月转化效率不发生改变。

基因型：C58 (rifR) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( gentR/strepR) Nopaline

储存条件：-70℃保存，避免反复冻融。

转化方法（采用冻融方法）

1.取-70℃保存的GV3101农杆菌感受态细胞于冰水浴中融化；

2. 无菌条件下，向感受态细胞中加入100ng质粒DNA，轻轻混匀，冰水浴中静置5分钟；

3.将离心管置于液氮中速冻5分钟；（注：也可以用干冰和无水乙醇混合物代替液氮）；

4.然后快速将离心管置于37℃水浴中保持5分钟，不要晃动水面；

5.将离心管放回冰水浴中，冰浴5分钟；

6.无菌条件下加入800μl无抗生素的2xYT或LB液体培养基，于28℃振荡培养2~3小时，菌体复苏；

7.6000rpm离心1分钟收菌，留100μl左右上清，轻轻吹打重悬菌体，取适量菌液，涂布于相应抗生素的LB平板上，于28℃培养箱中倒置培养48-72小时。

（具体操作详见说明书）

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