pET-28a(+) Seamless Cloning Kit

产品介绍：

pET-28a(+)载体为高水平的原核表达载体，在N端含有His-Tag, Thrombin（凝血酶）酶切位点，T7-Tag，在C端具有His-Tag。本产品提供pET-28a(+)经EcoRⅠ酶切后的线性化载体，可用无缝克隆技术将单个或多个DNA片段组装到载体上。

无缝克隆技术可在重组酶的作用下，只需一步反应，便可将片段克隆到任何载体中的任意位置，得到重组质粒。无缝克隆技术作为一种非常强大的克隆技术，具有快速、简便、高效、多片段组装和定向克隆等特点，用于单个 DNA 片段的克隆，多个 DNA 片段组装克隆以及多位点突变构建等实验目的。

产品特点：

1.pET-28a载体为原核表达载体，具有N-His, N-Thrombin, N-T7和C-His。

2.pET-28a经EcoRⅠ酶切后的线性化载体，省时省力。

3.无缝克隆技术只需要简单的 PCR 扩增就可以制备片段DNA。

4.可以克隆长片段和多片段DNA。

5.简单、快速、精确、定向克隆。

操作步骤：

1.pET-28a(+)线性化载体使用方法：

(1)pET-28a(+)线性化载体当做克隆载体使用，可以在扩增PCR产物的

上游引物 5’端添加序列：GCCTGGTGCCGCGCGGCAGCCATATG（需要5’端HIS标签时）

或者AACTTTAAGAAGGAGATATACCATG（不需要5’端HIS标签时）

下游引物 5’端添加序列：CTCAGTGGTGGTGGTGGTGGTGCTCGAG（需要3’端HIS标签时）

或者CTCAGTGGTGGTGGTGGTGGTGCTCGAGTCA（不需要3’端HIS标签时）

通过无缝克隆连接到pET-28a(+)中。

(1)测序引物

T7: 5'-TAATACGACTCACTATAGGG-3'

T7t: 5'-GCTAGTTATTGCTCAGCGG-3'

(2)
pET-28a(+)线性化载体为 EcoRⅠ酶切后的线性化载体，图谱及多克隆位点见下图。

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